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酶反應最適溫度一般為37℃-超微結構實驗
孵育液要避免嚴重的高滲和低滲。配制孵育液時各物質要充分
溶解。否則,各種成分的濃度會發(fā)生改變。溶解各種成分的順序,
一般按照已定的順序進行。孵育反應適合于在振蕩式恒溫水浴箱中
進行,孵育過程中不斷振蕩,使組織切片反應均勻完全,孵育液也
易滲入組織內部中。沒有振蕩式恒溫水浴箱時,在恒溫水浴箱中人
工振蕩孵育液。酶反應最適溫度一般為37℃,少數酶最適反應溫度
在20'C或高于37℃。孵育時間和溫度要根據不同的酶和組織通過實
驗確定。反應結束后要用配制孵育液的緩沖液或其它合適緩沖液或
生理鹽水等漂洗組織,一般換洗2—3次,每次l一5min(以下簡稱漂
洗)?稍0.05—0.1mol/L二甲胂酸鈉緩沖液中短時保存(4℃)
。漂洗的目的是去除組織中剩余的各種孵育液試劑,特別是多余的
捕捉劑。一般酶反應漂洗后最好及時進行后固定,如那些最終反應
產物為俄黑的酶反應,若不及時用織酸處理,反應產物會擴散或消
退。少數酶反應:(如鉛法、鈰法等)可在緩沖液內保存過夜后再進
行后固定。用餓酸后固定之前,對于那些反應前未充分固定(或未
固定)的樣品,可在酶反應后用2%戊二醛再固定1h,這時的固定不
會影響酶的活性,卻有利于超微結構的保存。
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