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本文標(biāo)題："細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的載玻片上的遷移速度實驗"
新聞來源：未知 發(fā)布時間：2017-3-16 17:25:26 本站主頁地址：http://www.nhgjxq.cn
細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的載玻片上的遷移速度實驗
按一定密度將細(xì)胞加于牽引實驗底物上，不要使細(xì)胞互相接觸，但
應(yīng)加入足夠于測量的細(xì)胞。在室溫條件下培養(yǎng)1～3 h，直至細(xì)胞恢復(fù)正
常形態(tài)和遷移速度。將細(xì)胞懸液注在二甲聚硅氧烷膜一側(cè)，使其流向另
一側(cè)，以便迅速覆蓋二甲聚硅氧烷膜。此步驟引起的膜破裂最少。正常
的遷移速度常指在涂布一層某種細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的載玻片上的遷移速
度。6．將盛有細(xì)胞的Petri皿放于顯微鏡載物臺(可實現(xiàn)溫度控制)上，
記錄細(xì)胞對二甲聚硅氧烷膜產(chǎn)生的皺褶。先記錄圖像視野的校準(zhǔn)尺度，
然后以此校準(zhǔn)尺度直接測量皺褶長度，或用裝有圖像捕獲器和圖像分析
軟件的計算機(jī)測量。7．將鋪有底物的蓋玻片(無細(xì)胞)封固于含有培養(yǎng)
液的Petri皿內(nèi)，再將培養(yǎng)皿放于裝有錄像系統(tǒng)顯微鏡的載物臺上。然
后，將帶有持針器的顯微操作儀安置在合適位置，以便針尖可達(dá)理想視
野的中央。8．將已校準(zhǔn)的微型針固定于顯微操作儀內(nèi)，用顯微操作儀
將微型針在二甲聚硅氧烷膜上向側(cè)面移動，直至產(chǎn)生皺褶，這些皺褶比
細(xì)胞產(chǎn)生的皺褶短或長。9．通過校準(zhǔn)的錄像記錄，確定針尖產(chǎn)生皺褶(
長度)時的移動距離。記錄錄像視野的校準(zhǔn)尺度，然后按此視野尺度計
算針尖產(chǎn)生皺褶前后的移動距離(同步驟6)。10．對于每條皺褶的長度
，應(yīng)按針的不易移動性(見支持方案1)和偏向計算產(chǎn)生皺褶的力，由此
得出力一皺褶長度曲線。11．用步驟10得出的力一皺褶長度曲線計算產(chǎn)
生皺褶(步驟6測量的)需要的力。支持方案1 校準(zhǔn)微型針材料直徑為25
tzm的鎳鉻熱電偶線(omega engineering)移液管拉制器(David Kopf i
nstruments)各種直徑和壁厚的Pyrex毛細(xì)玻璃管(drummond scientific
)小顯微鏡，光軸平行于工作臺目鏡網(wǎng)格(edmund scientific)，校準(zhǔn)尺
度適合于顯微鏡的目鏡。1．剪一段直徑為259m的鎳鉻線(長約30 cm)，
然后稱重，并仔細(xì)測量長度。根據(jù)此重量／長度比率，得出較短一段鎳
鉻線(將用于步驟3)的質(zhì)量。
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